A formulação do meio de cultura é essencial para a planta, podendo ser formulado com diferentes combinações para suprir as necessidades de cada espécie. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a influência das concentrações dos sais do meio de cultura MS e das doses de farinha de chia na biomassa de plântulas de algodão in vitro. O delineamento experimental foi inteiramente casuali­zado (DIC), esquema fatorial cinco diferentes concentrações do meio de cultura MS (0; 25, 50, 75 e 100% dos sais) x cinco doses de farinha de chia (0,0; 3,5; 7,0; 10,5 e 14,0 g L^-1) com quatro repetições. Após 20 dias da inoculação das sementes, foram avaliadas a biomassa fresca e seca da parte aérea e do sistema radicular. Conclui-se que para ganho de biomassa fresca da parte aérea, não há necessidade de elevar a concentração de sais MS e de doses de farinha de chia. A biomassa seca da parte aérea reduz em função da elevação da concentração de sais MS. E, concentrações acima de 50% de sais MS sem farinha de chia incrementam a biomassa fresca e seca do sistema radicular.