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O uso de bioestimulantes vem proporcionando bons resultados em várias culturas. A proteína Harpin é a principal componente de um bioestimulante elicitor de resistência. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar qual modo de aplicação da proteína Harpin apresenta melhor resultado para a produção de forragem de milho em segunda safra. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com cinco modos de aplicação do produto comercial H2Copla® (tratamento de sementes; via sulco de plantio; pulverização foliar; via sulco de plantio + pulverização foliar; e testemunha) com quatro repetições. Quando o grão atingiu o estádio entre farináceo e farináceo-duro, foram avaliados a massa fresca e a matéria seca da forragem. A aplicação da proteína Harpin é mais agronomicamente eficiente quando aplicada via tratamento de sementes no que se refere à produtividade de forragem de milho em segunda safra.