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Como o cultivo da segunda safra ocorre em uma época que é caracterizada por apresentar condições desfavoráveis como o regime de chuvas, radiação solar restrita e temperaturas baixas na fase final do ciclo, a produtividade é comprometida. Dessa forma, o emprego de novas tecnologias que visem o incremento de produtividade na cultura do milho se torna ainda mais importante. Assim, o presente estudo teve como objeto avaliar os modos de aplicação da proteína Harpin no crescimento de plantas de milho de segunda safra. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, sendo cinco modos de aplicação do produto comercial H2Copla®: tratamento de sementes (TS); via sulco de plantio (S); pulverização foliar (F); via sulco de plantio + pulverização foliar (S+F); e testemunha (T) com quatro repetições. Foram avaliados no florescimento feminino do milho a altura de plantas, altura de inserção da espiga superior, diâmetro do colmo, índice SPAD e teor de nitrogênio foliar. Independentemente do modo de aplicação da proteína Harpin, não há influência no crescimento de plantas de milho na segunda safra.