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A micropropagação possui grande aplicação na cultura do cafeeiro, no qual o sucesso da desinfestação do material vegetal consiste em um dos principais entraves para o estabelecimento in vitro. A alta taxa de contaminação e oxidação dos explantes inoculados no meio de cultura tem dificultado o cultivo in vitro de Coffea arabica. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de um protocolo eficiente, que reduza o índice de contaminação para a utilização posterior em estudos de calogênese e embriogênese somática. Foram desenvolvidos ensaios experimentais com explantes foliares de Coffea arabica L. cv. Rubi, submetidos a diferentes tratamentos de assepsia. As folhas foram lavadas com água e detergente neutro, imersas em solução de Fegatex®, na concentração 5ml L^-¹ de água, nos períodos de 5, 10, 15 e 20 minutos, constituindo 4 tratamentos, depois, imersas em solução de hipoclorito de sódio (1,25%) por 20 minutos, seguidos de tríplice lavagem. Excisados e inoculados em meio MS, que teve o pH ajustado para 5,7 e autoclavado a 121°C, à 1 ,5 atm, por 20 min. Os tubos com os explantes permaneceram em BOD sob fotoperíodo de 16h/8h e temperatura de 25°C. Após trinta dias do estabelecimento foram avaliados a % oxidação e % contaminação. O tratamento que obteve maior êxito foi a utilização do Fegatex® (5ml L^-¹ água) por 15 minutos em imersão, e o uso do hipoclorito de sódio (1,25%) por 20 minutos de imersão, tornando-se agentes eficientes no controle de fungos e bactérias em explantes.