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O objetivo deste trabalho foi testar diferentes formas de desinfestação no estabelecimento in vitro de Annona Crassiflora. Foram coletados os frutos e extraídas as sementes para a inoculação em meio de cultura e estabelecimento in vitro. As sementes foram submetidas a quatro diferentes processos de desinfestação, com vistas a encontrar o que pudesse ser mais eficiente favorecendo a germinação in vitro da espécie. Os tratamentos foram realizados com desinfestação padrão (álcool 70° e hipoclorito de sódio) e com adição de paraformaldeído e posterior inoculação em frascos com meio de cultura MS (MURASHIGE e SKOOG, 1962) acrescido de vitaminas em concentrações normais e 30 g.L-1de sacarose e 2,6 g.L-1 de phytagel e carvão ativado 1 g.L-1. Após trinta dias observou-se que duas desinfestações padrão + paraformaldeído foi o tratamento que obteve menor índice de contaminação (40%) quando comparado aos outros tratamentos.