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O ceftioufur é um antibiótico do grupo das Cefalosporinas de 3° geração, recomendado na clínica médica de bovinos leiteiros que dispensa descarte de leite quando utilizado conforme indicação da bula. O objetivo deste trabalho foi verificar a incidência de ceftiofur em amostras de leite in natura em municípios da região Sul de Minas Gerais. Este experimento foi executado no IFSULDEMINAS - Campus Muzambinho utilizando 1960 amostras de leite coletadas de compartimentos de caminhões tanque em várias cidades do Sul de Minas Gerais. Estas amostras foram analisadas por um processo qualitativo para determinação da presença ou ausência para Ceftiofur, sendo o kit utilizado o BetaStar® S Combo tendo como resultado 22 amostras positivas (1,12%). Os resultados demonstram que o Ceftiofur foi encontrado no leite em compartimentos de caminhões tanque em municípios do sul de Minas Gerais.